雙縮脲反應(yīng)
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在堿性溶液（NaOH）中，雙縮脲（H2NOC－NH－CONH2）能與銅離子（Cu2+）作用，形成紫色絡(luò)合物（該物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖），該反應(yīng)即雙縮脲反應(yīng)。
雙縮脲反應(yīng)是肽和蛋白質(zhì)所特有的，而為氨基酸所沒(méi)有的一種顏色反應(yīng)。一般分子中含有兩個(gè)氨基甲酪基（即肽鍵：-CO-NH-）的化合物與堿性
銅溶液作用，就會(huì)形成紫色或藍(lán)紫色絡(luò)合物。
注：除-CO-NH-有此反應(yīng)外，（-CONH2-）、（-CH2-）、（-NH2-）、（-CS-CS-NH2）等基團(tuán)亦有此反應(yīng)?！ ?/p>
雙縮脲反應(yīng)的鑒定
由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，且顏色深淺與蛋白質(zhì)的含量的關(guān)系在一定范圍內(nèi)符合比爾定律，而與蛋白質(zhì)的氨基酸組成及分子量無(wú)關(guān)，故可用雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量（借助分光光度計(jì)可減小誤差）。
雙縮脲反應(yīng)主要涉及肽鍵，因此受蛋白質(zhì)特異性影響較小。且使用試劑價(jià)廉易得，操作簡(jiǎn)便，可測(cè)定的范圍為1～10mg蛋白質(zhì)，適于精度要求不太高的蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，能測(cè)出的蛋白質(zhì)含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點(diǎn)是精確度低、所需樣品量大。干擾此測(cè)定的物質(zhì)包括在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生陽(yáng)性呈色反應(yīng)，銅離子也容易被還原，有時(shí)出現(xiàn)紅色沉淀?！ ?/p>
配制雙縮脲試劑的注意事項(xiàng)
雙縮脲試劑由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO4溶液（0.01g/mL）配制而成，配制比例為5：1，注意必須即配即用。
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