臨床生物化學(xué)/層析技術(shù)的原理和分類
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（一）層析技術(shù)的原理
層析法是目前廣泛應(yīng)用的一種分離技術(shù)。本世紀(jì)初俄國(guó)植物學(xué)家M.Tswett發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素?，F(xiàn)在層析法已成為生物化學(xué)、分子生物學(xué)及其它學(xué)科領(lǐng)域有效的分離分析工具之一。
層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來(lái)的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：一是固定相，它或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的成分；另一是流動(dòng)相，即可以流動(dòng)的物質(zhì)，如水和各種溶媒。當(dāng)待分離的混合物隨溶媒（流動(dòng)相）通過(guò)固定相時(shí)，由于各組份的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對(duì)比）不同，而且隨溶媒向前移動(dòng)，各組份不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動(dòng)相移動(dòng)時(shí)受到的阻滯作用小，向前移動(dòng)的速度快。反之，與固定相相互作用越強(qiáng)的組份，向前移動(dòng)速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達(dá)到將各組份分離的目的。
（二）層析法分類見表16-5～7
（三）層析法的特點(diǎn)與應(yīng)用
表16-5 按兩相所處狀態(tài)分類
| 流動(dòng)相 | |||
| 液體 | 氣體 | ||
| 液體 | 液-液層析法 | 氣-液層析法 | |
| 固定相 | |||
| 固體 | 液-固層析法 | 氣-固層析法 | |
層析法是根據(jù)物質(zhì)的理化性質(zhì)不同而建立的分離分析方法。根據(jù)層析峰的位置及峰高或峰面積，可以定性及定量。層析法與光學(xué)、電學(xué)或電化學(xué)儀器連用，可檢測(cè)出層析后各組份的濃度或質(zhì)量，同時(shí)繪出層析圖。層析儀與電子計(jì)算機(jī)聯(lián)用，可使操作及數(shù)據(jù)處理自動(dòng)化，大大縮短分析時(shí)間。由于層析法具有分辨率高、靈敏度高、選擇性好、速度快等特點(diǎn)，因此適用于雜質(zhì)多、含量少的復(fù)雜樣品分析，尤其適用于生物樣品的分離分析。近年來(lái)，已成為生物化學(xué)及分子生物學(xué)常用的分析方法。在醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境化學(xué)、高分子材料、石油化工等方面也得到了廣泛的應(yīng)用。
表16-6 按層析原理分類
| 名稱 | 分離原理 |
| 吸附層析法 | 組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑，各能力不同 |
| 分配層析法 | 各組份在流動(dòng)相和靜止液相（固相）中的分配系數(shù)不同 |
| 離子交換層析法 | 固定相是離子交換劑，各組份與離子交換劑親和力不同 |
| 凝膠層析法 | 固定相是多孔凝膠，各組份的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度不同 |
| 親和層析法 | 固定相只能與一種待分離組份專一結(jié)合，以此和無(wú)親和力的其它組份分離 |
表16-7 按操作形式不同分類
| 名稱 | 操作形式 |
| 柱層析法 | 固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿著一個(gè)向前移而達(dá)分離 |
| 薄層層析法 | 將適當(dāng)粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開，使各組份分離 |
| 紙層析法 | 用濾紙作液體的載體，點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開，使各組份分離 |
| 薄膜層析法 | 將適當(dāng)?shù)母叻肿佑袡C(jī)吸附劑制成薄膜，以類似紙層析方法進(jìn)行物質(zhì)的分離 |
 層析技術(shù)的應(yīng)用 | 層析法實(shí)驗(yàn)技術(shù)  |
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