標(biāo)記基因
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標(biāo)記基因原本是基因工程的專屬名詞,但是現(xiàn)在它已經(jīng)成為一種基本的實(shí)驗(yàn)工具,廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等方面的研究。
標(biāo)記基因是一種已知功能或已知序列的基因,能夠起著特異性標(biāo)記的作用。在基因工程意義上來說,它是重組DNA載體的重要標(biāo)記,通常用來檢驗(yàn)轉(zhuǎn)化成功與否;在基因定位意義上來說,它是對(duì)目的基因進(jìn)行標(biāo)志的工具,通常用來檢測目的基因在細(xì)胞中的定位?! ?/p>
舉例
1、“作為重組DNA載體的重要標(biāo)記”舉例:大腸桿菌的某種質(zhì)粒具有青霉素抗性基因(該基因可以認(rèn)為是標(biāo)記基因),當(dāng)這種質(zhì)粒與外源DNA組合在一起形成重組質(zhì)粒,并被轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞后,就可以根據(jù)受體細(xì)胞是否具有青霉素抗性來判斷受體細(xì)胞是否獲得了目的基因。當(dāng)人們用選擇培養(yǎng)基(比如含有青霉素的培養(yǎng)基),來培養(yǎng)受體細(xì)胞時(shí),能夠在培養(yǎng)基中存活下來的受體細(xì)胞就可以認(rèn)為是成功的導(dǎo)入了外源DNA,標(biāo)記基因就起作用了。
2、“作為目的基因的細(xì)胞定位工具”舉例:通過將可定位檢測的標(biāo)記基因(只要已知其序列,既可針對(duì)設(shè)計(jì)標(biāo)記探針,從而對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞定位)與目的基因進(jìn)行連鎖,當(dāng)成功轉(zhuǎn)化目的基因,該基因同時(shí)有成功表達(dá)后,既可間接對(duì)其進(jìn)行定位;或者已知目的基因(該基因本身就處于某細(xì)胞中)周邊序列,通過針對(duì)這些序列設(shè)計(jì)可插入標(biāo)記基因,繼而對(duì)該標(biāo)記基因進(jìn)行檢測,也可間接對(duì)目的基因定位?! ?/p>
另一種分類
引入“選擇基因”和“報(bào)告基因”的概念
選擇基因和報(bào)告基因都可以看做是標(biāo)記基因,都起著標(biāo)記目的基因是否成功轉(zhuǎn)化的作用,但是它們又有著各自的特點(diǎn)。
選擇基因(又稱選擇標(biāo)記基因),主要是一類編碼可使抗生素或除草劑失活的蛋白酶基因,這種基因在執(zhí)行其選擇功能時(shí),通常存在檢測慢(蛋白酶作用需要時(shí)間)、依賴外界篩選壓力(如抗生素、除草劑)等缺陷。而報(bào)告基因則是指其編碼產(chǎn)物能夠被快速測定、且不依賴于外界壓力的一類基因。
理想的報(bào)告基因通常具備如下基本要求:①、受體細(xì)胞中不存在相應(yīng)內(nèi)源等位基因的活性;②、它的產(chǎn)物是唯一的,且不會(huì)損害受體細(xì)胞;③、具有快速、廉價(jià)、靈敏、定量和可重復(fù)性的檢測特性。目前常用的報(bào)告基因有氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(cat)、熒光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)等。
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