臨床生物化學(xué)/熒光法和同位素法

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臨床生物化學(xué)

血清酶定量的檢測技術(shù)
- 酶活性測定的常用技術(shù)和方法
  - 量氣法
  - 比色法與分光亮度法
  - 熒光法和同位素法
  - 其它方法

分光亮度法有一個缺點，即靈敏度較低。有些標(biāo)本中酶濃度很低時往往測不出來。此時可考慮改用熒光法，可將測定靈敏度提高2-3個數(shù)量級。如科學(xué)家合成了一系列甲基傘形酮的衍生物，可取代對硝基酚衍生物做為一些水解酶的底物，由于水解產(chǎn)物甲基傘形酮有強烈熒光，大大提高測定的靈敏度，就是分光亮度法中最常用的NAD(P)H反應(yīng)系統(tǒng)，也可改用熒光法，在340nm紫外線激發(fā)下NAD(P)H產(chǎn)生強烈的藍(lán)色熒光，而NAD(P)不被激發(fā)。此外，還可使用在熒光法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的時間分辨熒光法，例如北京醫(yī)院就曾利用此種靈敏度極高方法測定很難用其它方法檢測的腦脊液中微量的烯醇化酶。熒光法不易掌握，對所用的試劑、容器和儀器都要求很高，否則易產(chǎn)生非特異熒光干擾測定，或者引起熒光的淬滅使測定不準(zhǔn)，故此種方法多用于研究實驗室，少用于常規(guī)實驗室。為提高靈敏度，還可使用同位素標(biāo)記的底物進(jìn)行酶測定，例如，有人以C12標(biāo)記的乙酰膽堿為底物測定膽堿酯酶，在酶作用后以離子交換法分離出含C14的乙酸。同位素方法由于對人體有害，操作麻煩，目前已很少使用。