臨床生物化學/血漿脂蛋白測定

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臨床生物化學

血漿蛋白及其代謝紊亂
- 脂蛋白和脂質(zhì)測定方法學評價
  - 血漿脂蛋白測定
  - 血清總脂質(zhì)測定
  - 膽固醇測定
  - 甘油三酯測定
  - 磷脂測定
  - 游離脂肪酸測定
  - 載脂蛋白測定

⒈超速離心分離純化法超速離心法是根據(jù)血漿中各種脂蛋白的比重（密度）的差異，在強大離心力作用下進行分離純化的一種方法。

血漿在不同密度鹽溶液中經(jīng)過超速離心，各種脂蛋白可按密度大小漂浮于不同鹽溶液介質(zhì)中。脂蛋白漂浮的衡量單位是漂浮率(Sf)。Gofman等于1950年確定，血漿脂蛋白在比重為1.063的NaCl溶液中（26℃），每秒達因（ldyn=10^-5N）克離心力的作用下的漂浮速度，稱為1個Svedbery單位（10^-13s）。Sf越大，脂蛋白密度越低。

一般操作方法是將血漿置于已準備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質(zhì)中，在強大離心作用下，各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于離心管中的密度梯度溶媒層，達到分離純化的目的。

超速離心法是分離純化脂蛋白的有效技術(shù)，目前廣泛應用于脂蛋白、載脂蛋白代謝的研究中。

⒉電泳分離法不同脂蛋白因蛋白質(zhì)含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進行分離，并根據(jù)血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠。由于醋酸纖維薄膜要預處理，很繁雜，外加電泳時間過長，目前已很少使用。臨床檢驗中主要采用瓊脂糖凝膠電泳進行分離，快而較為準確，儀器設(shè)備要求不高，被廣泛采用。聚丙烯酰胺凝膠作為支持物分離脂蛋白，值得推薦給臨床使用。

電泳分離法不論用何種支持物，血漿脂蛋白需用親脂染料如蘇丹黑B等進行預染再電泳，電泳完畢，脂蛋白根據(jù)電荷量不同，移動在不同的位置，再置于光密度計內(nèi)進行掃描，計算出各種脂蛋白的百分比，該數(shù)值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量，乳糜微粒停留在原點，無法測出其含量，正常空腹12h后，血漿中無CM存在。也可將電泳畢的瓊脂糖凝膠脂蛋白區(qū)帶切割置于試管中，加水溶解，進行比色，測出各自百分比，這一手工半定量法無法測準，屬淘汰之列。

⒊沉淀分離法由于脂蛋白的組成及理化性質(zhì)不同，在不同的聚陰離子和2價不同金屬離子（Mn²⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Ni²⁺、Co²⁺）以及不同pH值條件下，使脂蛋白與聚陰離子結(jié)合形成復合物沉淀，以達到分離定量各種脂蛋白的目的。

如肝素錳沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL量，即為血漿HDL的量。也可采用聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL，離心去上清液留沉淀，再定量沉淀其中的LDL，即血漿的LDL量。脂蛋白是一種既有蛋白質(zhì)又有膽固醇，還有磷脂的復合體，如何定量，尚無一種較為理想的方法。目前僅以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)，即測定HDL、LDL或VLDL中的膽固醇，并分別稱為高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）或極低密度脂蛋白-膽固醇（VLDL-C）。這類測定方法是目前臨床廣泛使用的方法，快速并較為準確。

⒋遮蔽直接測定法利用脂蛋白中某種特異抗體等物質(zhì)，先將血漿中LDL和VLDL包裹保護，不受測定膽固醇試劑的影響，而直接測定未被包裹的HDL中的膽固醇，在不離心分離條件下，測定出HDL的膽固醇含量，快速準確，是近年來發(fā)展的新技術(shù)，值得推廣應用。