基礎(chǔ)檢驗學(xué)/羊水標(biāo)本的采集

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臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)

體腔液檢查
- 羊水檢查
  - 羊水的生理和病理
  - 羊水標(biāo)本的采集
  - 胎兒成熟度檢查
  - 先天性遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷
  - 胎兒血型的預(yù)測

胎兒成熟度的監(jiān)測是決定高危妊娠選擇合理的分婚時間和處理方針的重要依據(jù)，主要是通過羊水中某物質(zhì)的消長來觀察胎兒的器官功能是否發(fā)育完善。

一、胎兒肺成熟度檢查

胎兒肺成熟的檢查對判定新生兒的特發(fā)性呼吸窘迫綜合征（idiopathic respiratory distress syndrone，IRDS），亦即新生兒肺透明膜病極有意義。此種情況主要見于妊娠37周前分婚的早產(chǎn)兒。病死率為50%-70%，此病也可見于剖宮產(chǎn)兒及產(chǎn)母有糖尿病可妊高征的初生兒。RDS占所有新生兒死亡病例為19.5%?；糝DS的新生兒被癥實為因肺泡表面活性物質(zhì)，主在是卵磷脂缺乏。因此使肺泡表面張力增加和穩(wěn)定性喪失而導(dǎo)致呼氣末肺泡萎陷，進行性倆肺膨脹不全。機體缺氧，肺泡上皮細(xì)胞破壞，通透明性增加，含纖維蛋白原，的液體不滲入肺泡壁形成透明膜，阻礙換氣而死亡。

常用的檢測方法有羊水泡沫振蕩試驗、羊水吸光度測定，薄層包譜法卵磷脂和鞘磷脂比值測定，酶法卵磷脂定量以及營業(yè)熒光偏振測定。

1．羊水泡沫試驗：羊水中的一些物質(zhì)可減低水的表面張力，經(jīng)振蕩后，在所液界面可形成穩(wěn)定的泡沫。在抗泡沫劑乙醇的存在下，蛋白質(zhì)、膽鹽、游離脂肪酸和不飽和磷脂等形成的泡沫在幾鈔鐘內(nèi)即使迅速破壞消除。而羊水中的肺泡表面活性物質(zhì)和磷脂是即親水又親脂的兩性界面物質(zhì)，它甩形成的泡沫在室瘟下可保持?jǐn)?shù)小時，故經(jīng)振蕩后可在報導(dǎo)液界成出現(xiàn)環(huán)繞試管邊緣的穩(wěn)定泡沫層。該試驗是最常用的床邊試驗，一般取試管2支。第一管羊水與95%乙醇之比為1：1，第二管比例為1：2。經(jīng)強力振蕩15-20秒后，靜置15分鐘后觀察，如第二管表面遙存在完整泡沫環(huán)，則L/S比值大于等于2，提示胎兒成熟，如僅第一管表面存在完整泡沫環(huán)，則L/S比值可能<2；如兩管均不見泡沫環(huán)，則提示胎我不成熟。進一步精確的羊水泡沫試驗還可以將羊水與95%乙醇進行一系列的稀釋試驗。

2．羊水吸光度測定：羊水吸光度測定是以羊水中磷脂類物質(zhì)的含量與其濁度之間的關(guān)系為基礎(chǔ)的。當(dāng)波長為650nm時，羊水中磷脂類物質(zhì)越多，A₆₅₀越大，胎兒的成熟度越好。測定時以蒸餾水調(diào)零，光徑1cm，波長650nm，讀取A值，有文獻(xiàn)報道認(rèn)為A₆₅₀大于等于0.075為陽性，表示胎兒成熟。如A₆₅₀小于等于0.050為陰性，表示胎兒不成熟。

3．薄層層析色譜測定卵磷脂/鞘磷脂比值在妊娠早期羊水中卵磷脂濃度很低，35書刊號后突然升高，而鞘磷脂在妊娠32-40周較穩(wěn)定，因此L和S在組成上的變化可以蝗顯反映也胎兒肺的成熟度，TLC法有較高的準(zhǔn)確性，原量是用有機溶劑氯仿抽提羊水中的磷脂，將標(biāo)本與L/S標(biāo)準(zhǔn)品置由硅膠G或H鋪成的TLC板上展開，可選擇不同的染色劑職鉬藍(lán)、羅丹明B硝酸氧鉍、磷鉬酸、甩化亞錫或飽和碘蒸氣等，著色后依層快慢標(biāo)準(zhǔn)品吸顯示磷肥酰甘油、磷肥酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、卵磷脂、和鞘磷脂的位置，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品對照，測量樣品L和S色譜斑面積或用光密度計掃描求得L/S比值。以L/S>2.0作為判定胎兒肺成熟的閾值。以此值預(yù)測IRDS的靈敏度為84%，非IRDS的了病率卻高于正常孕婦的新生兒，這點不應(yīng)忽視。近年來關(guān)于IRDS研究及其方法學(xué)進展很快，除上述方法外，還可用酶法直接測定卵磷肥和磷肥酰甘油，如卵磷脂<40mg/L則說明胎兒不成熟，羊水中如檢出磷脂酰甘油，即使L/S<2.0新生兒也不會出現(xiàn)IRDS，熒光偏振微粘度測量是根據(jù)較高的表面活性物質(zhì)可產(chǎn)生較低的偏振值，F(xiàn)P與創(chuàng)刊齡呈負(fù)相關(guān)的原理，以嚳偏振為單位，將凈偏振300mpol定為醫(yī)學(xué)決定水平，來判定IRDS。其靈敏度為87%，特異性為92%。

二、胎兒腎成熟度檢查

1．肌酐測定：羊水中的肌酐來撲克胎兒尿，為胎兒代謝產(chǎn)物，其排泄量反映腎小球的成熟度。雖然肌酐在反映胎兒成熟度方面是一個可靠的化學(xué)指標(biāo)，但其濃度受幾種因素干擾，因此在解稀和判斷抬兒成熟度時應(yīng)注意：①羊水中肌酐濃度受羊水量和胎兒肌肉發(fā)育程度和影響；②孕婦血漿肌酐濃度會影響羊水肌酐濃度。羊水肌酐范圍較寬，為159.1-353.6μmol/L，一般高于血漿值。肌酐濃度大于等于176.8μmol/L提示胎兒成熟，132.6-175.9μmol/L為可疑，小于等于131.7μmol/L為不成熟。

2．葡萄糖測定：羊水葡萄糖主要來自母體，部分來自胎兒尿。妊娠23周前隨羊膜面積擴大，羊水理增加，AFG逐漸增加，至24周達(dá)高峰2.29mmol/L左右，以后隨胎兒腎成熟，腎小管對葡萄糖重吸收增強，胎尿排糖量減少，加上胎兒盤通透明性隨胎齡增加嘏降低，AFG便逐漸減低，臨產(chǎn)時可降到0.40mmol/L以下。AFG<0.56mmol/L，提示胎兒腎發(fā)育成熟；AFG>0.80mmol/L為不成熟。

三、胎兒肝成熟度檢查

羊水中的膽紅不比物質(zhì)隨著胎兒肝臟酶系統(tǒng)逐漸完善而減少，因此羊水中膽紅素濃度可作為判斷胎兒肝成熟的一個指標(biāo)。根據(jù)膽紅素中450nm 有吸收峰的特點，取5-10毫升羊水以濾紙去除上皮細(xì)胞與胎脂，以蒸餾水調(diào)零，光徑1.0cm,波長450nm讀取吸收光度。A₄₅₀<0.02提示胎兒肝成熟;0.02-0.04為可疑，>0.04為未成熟。此外該項檢測還可協(xié)助診斷胎兒溶血及估計溶血的進展情況，為胎兒出生前后的臨床處置之不理提供依據(jù)。如果孕婦本人有某種原因的溶血性貧血或嚴(yán)重肝功能不良的時，也會致羊水的膽紅素升高，應(yīng)予以注意。羊水膽紅素定量應(yīng)<0.43μmol/L。

四、胎兒皮脂腺成熟度檢查

羊水中和脂肪細(xì)胞為從胎兒皮脂腺及汗腺脫落的細(xì)胞，晚期妊娠時，羊水中脂肪細(xì)胞出現(xiàn)率隨胎齡增加而增高，可作為胎兒皮膚成熟的指標(biāo)。將羊水的離心沉淀物滴于載玻片上，加1.36mmol/L硫酸尼羅藍(lán)水溶液1滴混勻，1-2min后加蓋片，于炎焰上 50-60攝氏度緩緩加熱2-3min，置顯微鏡下觀察，脂肪細(xì)胞無核，染色楊橘黃煞費苦心，其它細(xì)胞染色成藍(lán)煞費苦心，計數(shù)200-500個細(xì)胞，計算脂肪細(xì)胞出現(xiàn)率。如出現(xiàn)率>20%為成熟，10-20%為可疑，<10%為未成熟，但大于等于50%.為過熟。

五、胎兒唾液腺成熟度檢查

羊水中淀粉酶來自胎兒胰腺及唾液腺。胰腺型同工酶自始致終變化不大，唾液腺型同工酶自妊娠28周左右開始增加較快，顯示胎兒唾液腺有公泌功能，妊娠36周后其活性顯著上升，因此測定羊水中淀粉酶含量，可作為判斷胎兒成熟度一個指標(biāo)，胎齡>38>周，若酶活性> 120蘇氏單位為成熟兒，否則為未成熟兒。

肌酐、葡萄糖、膽紅素和淀粉酶測定方法詳見“臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗”。