基礎(chǔ)檢驗學(xué)/血漿凝血酶原時間測定

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臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)

血液學(xué)檢查
- 血栓與止血的一般檢查
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    - 凝血時間測定
    - 復(fù)鈣時間測定
    - 血漿凝血酶原時間測定
    - 活化部分凝血活酶時間測定

［原理］在抗凝血漿中，加入足夠量的組織凝血活酶（組織因子，TF）和適量的鈣離子，即可滿足外源凝血的全部條件。從加入鈣離子到血漿凝固所需在的時間即稱為血漿凝血酶原時間。PT的長短反映了血漿中凝血酶原、纖維蛋白原和因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平。

［方法學(xué)評價］一步法凝血酶原時間測定：由Quick在1935年創(chuàng)建。該法是在抗凝血漿中直接加入試劑一次完成測定，因此稱一步法。當時認為該試驗只反映了凝血酶原的活性（因子未發(fā)現(xiàn)凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）。原使用草酸鈉液作為抗凝劑，后來發(fā)現(xiàn)此液不利于凝血因子和保存，故已改用枸櫞酸鈉作抗凝劑。一步法PT常用靜脈抗凝血普通試管法手工測定；也有用毛細血管微量抗血測定，雖采血量少，但操作較繁瑣，故少用；也可用表面玻皿法測定，準確性較并管法高，而操作不如后者簡便。近年來，多采用半自動或全自動血液凝固儀測定，也以出現(xiàn)纖維蛋白絲作為終點。

手工法雖重復(fù)性差、耗時，但仍有相當程度的準確性，故仍廣泛應(yīng)用，其中以手工傾斜試管法為參考方法。半自動儀法，提高了光天化日確度和速度，但存在標本交叉污染的缺點。全自動儀法克服了半自動儀法不足之處，使檢測更加精確、快速、敏感與方便。

組織凝血活酶試劑質(zhì)量是影響PT測定準確性最重要的因素之一。組織凝血活酶的不同來源，不同制備方法，使務(wù)實驗室之間及每批試劑之間PT測定的結(jié)果差異大，可比性差，特別影響對口服抗凝血劑患者治療效果的判斷，因此早在1967年，WHO就將功贖罪67/40批號人腦凝血活酶標準品，作為以后制備不同來源的血活酶的參考物，并要求計算和提供每批組織凝血活酶的國際敏感指數(shù)。ISI表示標準品組織凝血活酶與每批組織凝血活酶PT校正曲線的斜率，即在雙對數(shù)的坐標紙上，縱坐標為用標準品測定的PT對數(shù)值，橫坐標為用待校正的組織凝血活酶測定的相同標本PT的對數(shù)值。60/40的ISI為1.0。ISI值越低，表示試劑愈敏感。目前務(wù)國大體是用國示標準品標化自己制備的本國國家標準品。新的組織凝血活酶標準品來自兔或牛的制備。其它各種組織凝血活酶劑的ISI必須按照新的標準品ISI進行校正。其次，WHO等國際的要威機構(gòu)還要求，PT正常對照值必需至少來自20名以上男女各半的混合血漿所測定得結(jié)果。并且還規(guī)定姨口服抗凝劑的患者必須使用國際PT結(jié)果報告形成，并用以為抗凝治療監(jiān)護的指標，INR=（病人凝血酶原時間/正常人平均凝血酶原進間）^ISI。作PT測定時，首先應(yīng)了解所用的組織凝積壓活酶試劑的ISI，ISI值通常由產(chǎn)生試劑的廠商提供的，測定PT后，即可計算出INR。為使用方便，INR也可從制造商提供的圖表中查提，最初規(guī)定INR必須使用手工法測得，在引入自動化凝血儀后，為了不影響INR的可靠性，制造商還應(yīng)提供儀器相應(yīng)的ISI值。使用ISi 和INR可減少或去除各實驗室PT測定的在技術(shù)和試劑上差異，使抗凝療法監(jiān)測過程中，各種PT結(jié)果有可比性。

近年，國外用重組組織因子作為PT測定。γ-TF比其它動物性來源的漲血活酶對凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ敏感性高，但目前未被推廣使用。

一步法PT結(jié)果報告方法：一般情況下，可同時報告被檢標本PT和正常對照PT以及PT比率。凝血酶原比率=被檢血漿PT時間/正常血漿PT時間。過去曾用凝血酶原活動度報告，現(xiàn)已少用；當PT用于監(jiān)測口服抗凝劑時，則必須同時報告INR值。

二步法凝原時間測定：首先由Warner等創(chuàng)建，后由Ware/Seegers等改良，此法第一步生成凝血酶，第二步是測定生成的凝血酶，從而間接測得凝血酶原時間。二步法雖然雙較合理，但操作繁瑣，未被廣泛應(yīng)用。

［參考值］一步法凝血酶原時間：11～13s

凝血酶原比值：0.82～1.15

［臨床意義］

1．PT延長：PT超過正常對照3秒以上或凝血酶原比值超過正常范圍即為延長，主要見于：①先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ減少及纖維蛋白原的缺乏（低或無纖維蛋白血癥）；②獲得性凝血因子缺乏，如DIC、原發(fā)性纖溶亢進癥、肝病的阻塞性黃疸和維生素K缺乏、血循環(huán)中抗凝物質(zhì)增多等。

2．PT縮短：①先天性因子Ⅴ增多；②DIC早期（高凝狀態(tài)）；③口服避孕藥、其它血栓前狀態(tài)及血栓性疾病（凝血因子和血小板活性增高，血管損傷等無法為血栓形成的基礎(chǔ)）。

3．口服抗凝藥的監(jiān)護臨床上當NIR為2-4時為抗凝治療的合適范圍，當INR>4.5時，如纖維蛋白水平和血小板數(shù)仍正常，則提示抗凝過度，應(yīng)三少或停止用藥。INR>4.5時，同時伴有纖維蛋白原和血小板減低，則右能是DIC或肝病等所致也應(yīng)減少或停止口服抗凝劑。